二色波罗蜜抑制组织蛋白酶K活性成分的研究
硕士学位申请者：易文芳
指导老师：任刚教授
论文摘要：
二色波罗蜜 (Artocarpus styracifolius Pierre)，为桑科波罗蜜属的一种乔木，产于我国南方各省，又名红枫荷、半枫荷，民间以其根入药，具有祛风除湿、舒筋活血的功效，用于风湿关节炎，腰肌劳损，半身不遂，跌打损伤，扭挫伤等症。迄今，有关二色波罗蜜化学及药理研究的报道较少。仅Melanie Bourjot等从二色波罗蜜树皮的乙酸乙酯提取物中分离了8个异戊烯基黄酮类成分，采用体外疟原虫氯喹抗性株（FcB1）模型测定其抗疟活性，活性测试结果表明，所有的化合物均具有抗疟活性，其中部分单体还具有明显的抗锥虫活性。本课题组前期研究发现，二色波罗蜜提取物具有组织蛋白酶K抑制活性。为进一步明晰二色波罗蜜中药用活性成分，本文建立了抑制组织蛋白酶K活性筛选模型；对二色波罗蜜活性部位进行系统的化学成分研究；在此基础上，评价了其中的20种酚性成分抑制抑制组织蛋白酶K活性，并初步阐明其构效关系。具体研究内容如下：
1、组织抑制蛋白酶K活性成分的筛选模型的建立及二色波罗蜜活性部位的筛选。以组织蛋白酶K为分子靶标，建立适合于高通量筛选的筛选模型。确定了最佳底物浓度、酶浓度、反应时间和反应温度，分别为5 μM、0.011 μM、2 h和37 ℃；并用阳性药物E64验证筛选模型的可靠性，确定建立的筛选模型可适用于高通量筛选。并用上述筛选模型对各提取部位进行筛选，确定二色波罗蜜抑制组织蛋白酶K活性部位为氯仿部位。
2、二色波罗蜜活性部位的化学成分研究。运用现代色谱提取分离手段对二色波罗蜜根的95%乙醇提取物的氯仿部位进行了系统的分离纯化，共得到20个确定结构的化合物，根据其理化性质和现代波谱学技术（包括1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、NOESY、H-H COSY、ESI-MS等）鉴定了这些化合物的结构，包括7个异戊烯基化2-芳基苯并呋喃类化合物，、2个异戊烯基环合二苯乙烯类化合物、4个异戊烯基黄酮类化合物、2个异戊烯基查尔酮类化合物、2个木脂素、2个简单酚酸以及1个二苯乙烯类化合物。它们分别为：ASR-1：Artostyracins A、ASR-2：ArtostyracinsB、ASR-3：ArtostyracinsC、ASR-4：albafuranA、ASR-5：mulberrofuranV、ASR-6：ArtoindonesianinO、ASR-7：Moracin N、ASR-8：Hypargystilbene A、ASR-9：Hypargystilbene C、ASR-10：albanin A、ASR-11：8-Isopentenylluteolin、ASR-12：Kuwanon C、ASR-13：artocarpone B、ASR-14：2,4,2',4'-tetrahydroxy-3'-(3-methyl-2-butenyl)-chalcone、ASR-15：3′-[γ-hydroxymethyl-(E)-γ-methylallyl]-2,4,2′,4′-tetrahydroxychalcone11′-O-coumarate、ASR-16：5,5′-dimethoxysecoisolariciresinol、ASR-17：丁香脂素((+)-syringaresinol)、ASR-18：scopoletin、ASR-19：xylarolide、ASR-20：反式氧化白黎芦醇(trans-oxyresveratrol)。其中，ASR-1, ASR-2, ASR-3为新化合物，ASR-4, ASR-11, ASR-15, ASR-16, ASR-17, ASR-19为首次从桑科中分得，ASR-5, ASR-7, ASR-12, ASR-18为首次从波罗蜜属中分得，ASR-6, ASR-8, ASR-14, ASR-20为首次从二色波罗蜜中分得。
3、二色波罗蜜活性部位单体化合物抑制组织蛋白酶K活性评价。用上述建立的筛选模型对得到的20个单体化合物（ASR-1~ASR-20）进行活性评价。结果显示：除了化合物ASR-11和ASR-14具有较弱抑制组织蛋白酶K活性之外，其他化合物均未能检测出抑制活性。
综上，本文建立的抑制组织蛋白酶K活性的筛选模型，对于波罗蜜属植物二色波罗蜜的抑制组织蛋白酶K活性部位的化学成分进行了较深入的研究，论文的研究成果对发现治疗骨质疏松症的高效低毒先导化合物和二色波罗蜜植物资源进一步合理开发利用具有一定的指导意义。
关键词：二色波罗蜜；活性部位；筛选模型；异戊烯基黄酮；异戊烯基2-芳基苯并呋喃；异戊烯基二苯乙烯；组织蛋白酶K
硕士期间发表学术论文：
[1]Ren Gang (本人导师), YiWen-Fang, Zhong Guo-Yue, Yuan Wen-Jun, Peng Jia-Bing, Ma Zhi-Lin, ZengJin-Xiang*. Artostyracins A-C, three new isoprenylated 2-arylbenzofurans from Artocarpus styracifolius. Phytochemistry Letters. 10 (2014)235–239.
[2]易文芳, 彭加兵, 任刚(本人导师), 蒋伟, 梁健, 元文君. 二色波罗蜜根的化学成分研究. 中药材. 2015（已接收）
